【直播預告】學一下,從此酵母雙雜交實驗難逢敵手!

          來源: 武漢金開瑞生物工程有限公司   2020-10-26   訪問量:677評論(0)

          分子生物學研究,尤其是人類基因組計劃的迅速發展,為適應對眾多基因或蛋白進行功能研究的發展趨勢,已涌現出很多種新技術,酵母雙雜交就是其中的一種。那么我們就來簡單了解下酵母雙雜交系統吧。

          酵母雙雜交系統是一種鑒定和檢測蛋白質相互作用的研究方法,因其具有靈敏性高、功能強大、適用范圍廣等特點,現已被應用于多個研究領域。


          核蛋白酵母雙雜交:

          核蛋白酵母雙雜交技術最初由Fields等人在研究酵母轉錄因子GAL4性質時建立,后續經過不斷改進已發展成為一種成熟的蛋白-蛋白互作研究工具,具有簡便、靈敏、可反映蛋白在活細胞內互作真實情況的特點,被廣泛應用于互作蛋白的篩選、蛋白相互作用的鑒定/驗證、蛋白互作機理的探究、蛋白連鎖圖譜繪制等工作。



          膜蛋白酵母雙雜交:

          DUALmembrane技術在傳統的酵母雙雜交系統的基礎上,巧妙地利用分離的泛素系統(split-ubiquitin)進行蛋白質相互作用的篩選;泛素作為降解信號分子,人為分成兩部分:N端(Nub),C端(Cub),互補重構的完整泛素分子可被泛素專一性蛋白酶(UBPs)識別,從而導致與泛素相連的蛋白被酶解。


          酵母雙雜交技術的應用

          植物:自交不親和機理研究……
          病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白篩選……
          信號通路:轉錄因子、雌激素α受體相互作用蛋白篩選……
          癌癥醫學:癌癥相關蛋白、凋亡相關蛋白相互作用蛋白篩選……
          寄生蟲醫學:毒力因子致病機制研究、半乳糖凝集素互作蛋白篩選……
          基礎原理研究:肌球蛋白、蛋白酶體調節因子相互作用蛋白篩選、受精卵發育……

          酵母雜交優勢

          (1)真實環境
          它是一種真核細胞內的反應,相對于眾多的體外實驗和細菌來說,更加貼近于真實。
          (2)高度靈敏
          酵母雙雜交系統可以檢測到十分微弱和短暫的蛋白相互作用。
          (3)海量篩選
          從cDNA文庫中篩選與目的蛋白相互作用的新蛋白,在蛋白功能未知或已知的條件下,采用不同來源的cDNA文庫作為prey 篩選,可以發現新的基因,提供新的線索。
          A、核蛋白酵母雙雜交
          B、Split-ubiquitin膜蛋白酵母雙雜交
          C、cDNA質粒文庫構建服務
          (4)利用酵母雙雜交建立基因組蛋白連鎖圖
          眾多的蛋白質之間在許多重要的生命活動中都是彼此協調和控制的,基因組中的編碼蛋白質的基因之間存在著功能上的聯系。

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