【直播預告】學一下，從此酵母雙雜交實驗難逢敵手！
          
				        
          
						
          
						來源：
							武漢金開瑞生物工程有限公司
						  2020-10-26  
						訪問量：677評論(0)
						
          
						
          
						
						

          

												
						
						
          
						
          
						
          
						
          
				        
				        
          
						
						
						
          分子生物學研究，尤其是人類基因組計劃的迅速發展，為適應對眾多基因或蛋白進行功能研究的發展趨勢，已涌現出很多種新技術，酵母雙雜交就是其中的一種。那么我們就來簡單了解下酵母雙雜交系統吧。
          


          

          

          酵母雙雜交系統是一種鑒定和檢測蛋白質相互作用的研究方法，因其具有靈敏性高、功能強大、適用范圍廣等特點，現已被應用于多個研究領域。
          


          

          


          

          

          核蛋白酵母雙雜交：
          


          

          

          核蛋白酵母雙雜交技術最初由Fields等人在研究酵母轉錄因子GAL4性質時建立，后續經過不斷改進已發展成為一種成熟的蛋白-蛋白互作研究工具，具有簡便、靈敏、可反映蛋白在活細胞內互作真實情況的特點，被廣泛應用于互作蛋白的篩選、蛋白相互作用的鑒定/驗證、蛋白互作機理的探究、蛋白連鎖圖譜繪制等工作。
          


          

          


          

          


          

          

          膜蛋白酵母雙雜交：
          


          

          

           DUALmembrane技術在傳統的酵母雙雜交系統的基礎上，巧妙地利用分離的泛素系統（split-ubiquitin）進行蛋白質相互作用的篩選；泛素作為降解信號分子，人為分成兩部分：N端（Nub），C端（Cub），互補重構的完整泛素分子可被泛素專一性蛋白酶（UBPs）識別，從而導致與泛素相連的蛋白被酶解。
          


          

          


          

          

          酵母雙雜交技術的應用
          


          

          

          植物：自交不親和機理研究……
          

          病毒：朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白篩選……
          

          信號通路：轉錄因子、雌激素α受體相互作用蛋白篩選……
          

          癌癥醫學：癌癥相關蛋白、凋亡相關蛋白相互作用蛋白篩選……
          

          寄生蟲醫學：毒力因子致病機制研究、半乳糖凝集素互作蛋白篩選……
          

          基礎原理研究：肌球蛋白、蛋白酶體調節因子相互作用蛋白篩選、受精卵發育……
          


          

          

          酵母雜交優勢
          


          

          

          （1）真實環境
          

          它是一種真核細胞內的反應，相對于眾多的體外實驗和細菌來說，更加貼近于真實。
          

          

          （2）高度靈敏
          

          酵母雙雜交系統可以檢測到十分微弱和短暫的蛋白相互作用。
          

          

          （3）海量篩選
          

          從cDNA文庫中篩選與目的蛋白相互作用的新蛋白，在蛋白功能未知或已知的條件下，采用不同來源的cDNA文庫作為prey 篩選，可以發現新的基因，提供新的線索。
          

                A、核蛋白酵母雙雜交
          

                B、Split-ubiquitin膜蛋白酵母雙雜交
          

                C、cDNA質粒文庫構建服務
          

          

          （4）利用酵母雙雜交建立基因組蛋白連鎖圖
          

          眾多的蛋白質之間在許多重要的生命活動中都是彼此協調和控制的,基因組中的編碼蛋白質的基因之間存在著功能上的聯系。
          


          

          

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