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      識破各種污染,拯救您的細胞

      來源: 上海逍鵬生物科技有限公司   2020-10-26   訪問量:734評論(0)

      小伙伴們遇到過這種情況嗎?

      當您的課題進行到白熱化程度時

      卻發現細胞被污染了

      此時大家的心情可謂五味雜陳

      形容一下就是

      問君能有幾多愁,眼淚恰似一江春水向東流

      不過,別擔心

      逍鵬生物煉就火眼金睛

      幫助大家識破各種污染,拯救您的細胞



      我們先來看看污染的真面目,總結下來無非以下幾種類型:

      我們一起來分析它們的特征:


      1

      真菌-深藏不露

      真菌之所以深藏不露,是因為它們一般不會導致培養基變渾濁,所以在污染早期,很難發現它們的蹤跡。直到長到一定規模后在鏡下可觀察到分叉細絲狀的菌絲(有些呈管狀,樹枝狀,串珠狀的菌絲)(如圖1,圖2)。這類污染中,為首的污染代表是酵母菌:顯微鏡下常見成串的珠狀物,形態呈卵形,大約比細胞小5~10倍,當其進行出芽生殖時,會聚集成連體結構;爆發污染嚴重時,會造成培養基pH值改變,不易除去。



      圖1. 真菌污染 圖2. 真菌污染


      逍鵬生物可提供以下解決方案:

      表1.產品列表

      產品名稱-中文名稱

      貨號

      作用種類

      兩性霉素B,250mg/ml

      03-028-1B

      真菌,酵母菌和霉菌

      兩性霉素B,2500mg/ml

      03-029-1B

      制真霉素,10000units/ml

      03-030-1C

      真菌,酵母菌和霉菌

      青鏈雙抗(青霉素-鏈霉素)

      03-031-1B

      對革蘭氏陽性菌G+,革蘭氏陰毒性G-

      青鏈雙抗(青霉素-鏈霉素)10X濃縮

      03-031-5B

      青鏈霉素,制真菌素三抗

      03-032-1B

      真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-

      青鏈霉素,兩性霉素B三抗

      03-033-1B

      真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-

      青鏈霉素,新霉素三抗

      03-034-1B

      真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-

      硫酸慶大霉素溶液,50mg/ml

      03-035-1B

      對革蘭氏陽性菌,革蘭氏陰性菌,支原體

      卡那霉素溶液,10mg/ml

      03-049-1B

      對革蘭氏陽性菌,革蘭氏陰性菌,支原體


      2

      細菌-屢見不鮮

      細菌種類繁多,分布廣泛,是最容易污染細胞的微生物。


      細菌在顯微鏡下呈黑色細沙狀(如圖3),典型特征是,可以使培養基在短時間內變成黃色或白色渾濁。細胞形態會出現多角,多核狀況;貼壁細胞不附著,停止生長甚至死亡。

      圖3. 細菌污染


      逍鵬生物可提供以下解決方案如上表1


      3

      支原體-無孔不入

      支原體之所以無孔不入是因為它們種類繁多,常以寄生或腐生營養方式生長,廣泛存在于環境之中。
      支原體是細胞培養過程中的常見污染,經常來源于實驗人員(支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道)、動物源血清及胰酶、消毒不完全的器具。其大小只有0.15~0.3μm,所以能通過一般標準的細胞培養過濾方法,0.22μm過濾膜。其污染特征不是很明顯,增長速度相較于細菌比較緩慢,污染初期(輕微)培養基可能依然清澈不會變黃,所以輕微污染時不容易用常規方法(細胞外觀觀察或是DNA染色法)確認。
      支原體會緩慢改變細胞形態、增殖、基因表達、蛋白合成及代謝反應,它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌體實驗結果偏差。
      如下圖所示:

      圖4. 支原體污染


      逍鵬生物可提供:支原體檢測/處理/預防全套解決方案。
      01

      即用型細胞培養中支原體檢測PCR試劑盒


      檢測結果如圖:

      大家可自行根據檢測結果進行對比。


      02

      支原體處理試劑




      03
      支原體預防噴霧



      支原體檢測/處理/預防全套解決方案

      表3. 產品列表

      中文名稱

      貨號

      備注

      支原體污染檢測試劑盒

      20-700-20


      支原體污染處理試劑

      03-036-1B/C


      03-037-1B/C


      03-038-1B/C


      支原體、細菌、真菌污染預防噴霧劑

      IC-110100


      支原體預防試劑

      01-867-1B

      100ml,有效消毒二氧化碳培養箱中的水盤

      01-916-1E

      50ml,有效消毒任何形式的水浴環境


      4

      黑膠蟲-神秘莫測

      黑膠蟲污染后,在鏡下可看到密密麻麻的小黑點在培養基中自主游動。目前科學界對黑膠蟲的身份并無定論。Dr.Cell 目前檢測的黑膠蟲樣本,62%為細菌,38%為支原體。黑膠蟲在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等,具有細胞毒性,可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡。


      點擊進入公眾號查看黑膠蟲游動視頻

      逍鵬生物可提供以下解決方案:

      使用三抗(貨號:03-032-1B)結合支原體處理試劑(貨號:03-03603-03703-038)有效清除實驗室黑膠蟲污染。

      5

      病毒-專一任性

      病毒之所以“專一任性”是因為其污染和傳播具有細胞專一性,“鐘情”到一輩子吊死在一顆“樹”上。病毒污染可能來自宿主動物細胞或病人,在細胞培養污染物中是相對最難檢測的。被病毒污染的細胞在顯微鏡下能明顯觀察到細胞碎片增多、腫大、圓縮、脫落等病態變形,嚴重時會在單層細胞上觀察到局部破損空斑(如圖5,圖6)。

      圖5. 感染之前 圖6. 感染24小時后

      逍鵬生物提供的解決方案:選用輻照血清以殺滅病毒。

      6

      細胞交叉污染-玉石難分

      細胞交叉污染之所以“玉石難分”是因為其長相和實驗所養的目的細胞形態相似,難以分辨。對于細胞株的交叉污染,曾有文獻報道統計,目前使用的細胞株大約有15~20%不是科學家們所認為的細胞,而在生物醫藥領域中,細胞來源和細胞株身份鑒定檢測的觀念是普遍缺乏的。

      細胞株的交叉污染,常因不經意的實驗疏忽(不同細胞株分盤時,共享一瓶培養基;槍頭、移液管忘記更換,而造成不同細胞株之間的混合污染;實驗操作人員錄入錯誤細胞株名稱;傳代時的培養皿;冷凍細胞時的凍存管)而發生,繼而造成后續數據搜集錯誤。

      目前大部分的科學期刊都已有“細胞相關實驗論文發表前,均需附上細胞鑒定報告”的規定(可查閱:文章發表前要求提供細胞鑒定的雜志),以此保證數據來源的正確性。

      那么如何鑒別呢?細胞身份驗證方式:短串聯重復序列(STR)、同功酶分析、染色體組分型、擴增片段長度多態性(AFLP)的特征分析等方法。其中STR,是目前國際細胞庫(包括:ATCC、DSMZ或是JCRB)常用于細胞株身份鑒定方法。

      Dr.Cell可提供:點擊名稱鏈接可進入詳情頁

      1. 人源細胞系STR鑒定(STR Authentication)

      2. 細胞物種鑒定(Species Identification)-15種常見模式動物的鑒定



      溫馨提示,至少每半年一次進行細胞鑒定,理想情況每2-3個月鑒定一次,且課題開展前最好先確認使用的細胞身份。

      本期介紹就到這里啦

      各位老師可以根據我們的方法進行分析

      如果您還是未找出問題所在

      不要著急丟棄您的細胞們

      歡迎關注逍鵬生物

      我們有專業的人士可以為您答疑解惑

      幫您搶救回來噢



      注:本文中部分圖源和視頻來自百度搜索引擎和客戶提供。


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