western blot威斯騰生物

          銀牌供應商 

          技術服務信息

          服務名稱:western blot
          服務類別:免疫學服務 - 免疫組化/免疫沉淀/Western blot
          價格:歡迎來電詳詢023-65316016,023—65316556
          允許參觀:允許參與實驗
          所在區域:重慶.重慶
          更新時間:2021/4/15 9:33:00
          瀏覽人數:2658
          服務商:威斯騰生物
          誠信指數:1849點
          了解更多:進入公司展臺
          使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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          供應商聯系卡

          威斯騰生物
          地址:
          重慶高新區生物醫藥研發產業園D棟
          郵編:
          400039
          電話:
          4006756758
          傳真:
          023-65316016
          聯系人:
          張老師
          所在區域:
          重慶·重慶
          郵件:
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          技術服務詳細描述

           Western Blotting實驗技術對外服務(傳統方法)

           

          免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(Western blotting),它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。

          操作流程:

          1樣品準備

          1)分別取大約200mg組織加入液氮碾磨成粉末狀,按每200mg組織加900μl上樣Buffer(無溴酚藍)和100ul 10mg/ml PMSF,混勻,玻璃勻漿器冰點勻漿

          2)4℃,12000rpm離心10min

          3)取上清夜-70℃凍存24hr

          5)4℃12000rpm再次離心10min,取上清分裝,一份用于定蛋白,另一份加入溴酚藍(0.1%(W/V))后于100℃加熱4min,后于-20℃保存待用。

          2定蛋白及計算電泳上樣量

          根據總蛋白測定試劑盒說明書操作測定樣本中的總蛋白含量,電泳上樣量定為40ug

          3電泳

          1)安裝好電泳裝置

          2)根據不同的指標配制相應濃度的分離膠,灌膠約3/5體積,液封(<10%用0.1%SDS,>10%用異丙醇)

          3)30min后,待凝后傾去封液

          4)配5%的濃縮膠,灌膠至距平板頂部2mm處,插入梳子, 30min后,待凝后拔出梳子,用去離子水清洗加樣孔,用濾紙吸干

          5)上樣:各樣品取50ug上樣,marker取10μl上樣(上樣前需按說明書進行預處理)

          6)緩慢加入內、外槽緩沖液,接通電源,90v電泳至指示劑進入分離膠后,調電壓至150V繼續電泳

          7)當指示劑距平板底端1cm處時停止電泳

          4 轉膜及檢測

          1)準備2個Φ12cm的平面皿,一個裝去離子水浸泡NC膜20min,另一裝轉移緩沖液浸泡海綿和濾紙20min

          2)取下膠,切除濃縮膠部分后,將分離膠浸入轉移緩沖液中約5min

          3)按順序安裝好轉膜裝置(黑色板-海綿-三層濾紙-凝膠-***纖維膜-三層濾紙-海綿-紅色板)

          4)完全排除氣泡,4℃,100mA轉膜2hr。

          5)傾去轉膜緩沖液,拆除轉膜裝置,將***纖維膜放入麗春紅中搖床染色15min,用去離子水清洗至能看到條帶,后用鉛筆標出marker位置,再用去離子水震蕩以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右

          6)將膜轉移至另一容器中,用5%脫脂奶粉封閉, 4℃過夜

          7)將膜轉移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的一抗

          8)37℃搖床孵育約2hr

          9)PBST洗滌4次,每次5min

          10)將膜轉移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的二抗,37℃搖床孵育約30min

          11)PBST洗滌4次,每次5min

          12)將膜轉移至盡可能小的容器中并加入BCIP/NBT底物,室溫孵育30min

          13)取出NC膜,用蒸餾水漂洗后晾干

          14)掃描及分析

          服務要求:

          • 樣本要求:組織樣品,每份樣本約250-500mg,新鮮或正確保存的組織。細胞樣本:每份樣本:1*10 6-1*10 7細胞數。
          • 客戶提供有效的一抗,(國產抗體一般不接納) 一抗自備或代購。
          • 客戶提供欲檢測目的蛋白的詳細背景資料。以及提供樣本的種屬,類型。

          結果提供:

          • 目的蛋白實驗圖片。
          • 灰度分析結果。(免費分析)
          • 內參結果。(免費跑膠)
          • 詳細的實驗步驟。
          • 免費提供蛋白樣本保存液。

          完成時間:

          接受樣本后,1月以內。

          注意事項:

          1、客戶要確保模型建造的成功性。

          2、客戶要確保抗體的有效性。

          3、如要加快的客戶可以和我們聯系溝通。

          4、收費標準:以每張膜8個樣本收費,不足8個樣本的按8個樣本收費)

          威斯騰實驗服務流程



          威斯騰生物服務項目

          分子生物學檢測蛋白質與免疫學動物實驗
          實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
          免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
          ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
          生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
          雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
          染色質免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表達純化心肌缺血模型
          GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
          SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
          高血壓模型
          病毒包裝實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
          過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
          過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
          逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
          腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
          肝炎-肝硬化-肝癌模型
          蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
          細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
          BioPlex懸浮芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
          生長因子芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
          炎癥因子芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
          血管生成因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
          凋亡因子芯片神經元細胞培養

          生物在線聲明:以上所展示的信息由企業自行提供,內容的真實性、準確性和合法性由發布企業負責。生物在線對此不承擔任何保證責任。

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            免疫印跡 Western blot   [供應商:上海捷蘭生物技術有限公司]
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