siRNA合成/慢病毒包裝/RNA干擾服務威斯騰生物

          銀牌供應商 

          技術服務信息

          服務名稱:siRNA合成/慢病毒包裝/RNA干擾服務
          服務類別:分子生物學服務 - siRNA/miRNA服務
          價格:歡迎來電詳詢023-65316016,023—65316556
          允許參觀:允許參與實驗
          所在區域:重慶.重慶
          更新時間:2021/4/15 9:33:00
          瀏覽人數:5667
          服務商:威斯騰生物
          誠信指數:1849點
          了解更多:進入公司展臺
          使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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          供應商聯系卡

          威斯騰生物
          地址:
          重慶高新區生物醫藥研發產業園D棟
          郵編:
          400039
          電話:
          4006756758
          傳真:
          023-65316016
          聯系人:
          張老師
          所在區域:
          重慶·重慶
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          技術服務詳細描述

          siRNA合成/慢病毒包裝/腺病毒包裝


          siRNA合成

          siRNA合成是機體或細胞實現基因沉默最為簡捷的方法,成本低、轉染效率高,是RNAi臨床治療的最佳手段,在藥物開發方面具有不可替代的優勢。 通用生物可為客戶提供普通的化學合成siRNA,同時可根據客戶需求,提供多種修飾的siRNA。


          慢病毒包裝

          慢病毒Lentivirus是逆轉錄病毒的一種,具有逆轉錄病毒的基本結構和特性;能整合入宿主細胞因組,長期表達,可用于轉基因動物制備;但也有不同于逆轉錄病毒的組分和特性;比逆轉錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂細胞,更重要的是還能感染非分裂的細胞。

          利用Lentivirus構建的shRNA表達載體,與化學合成的siRNA和基于瞬時表達載體構建的shRNA相比,一方面可以替代后者,另一方面,Lentivirus-shRNA載體經包裝系統包裝后,可用于感染依靠傳統轉染試劑難于轉染的細胞(如原代細胞、懸浮細胞等),并且在感染后可以整合到受感細胞的基因組,進行長時間的穩定表達,是制備穩定表達shRNA細胞株和進行體內實驗(in vivo)的最有效手段。
          目前我們能夠為客戶提供從載體構建到慢病毒包裝純化和檢測的一站式服務; 同時公司還在高效慢病毒生產技術的基礎上建立并完善了慢病毒載體制備轉基因動物的實驗技術。

          慢病毒載體構建包裝流程

          1. 根據目的基因相關信息(序列,基因序列號等),構建含有外源基因或序列的重組載體;
          2. 對于測序正確的重組質粒,提取和純化高質量(不含內毒素)的重組質粒;
          3. 使用高效重組載體和慢病毒包裝質粒共轉染293T 細胞,進行病毒包裝并收集上清液;
          4. 通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒;
          5. 用病毒液感染293T細胞,測定病毒滴度;

          用高質量的病毒液感染靶細胞,通過定量PCR或者Westenblot檢測目的基因表達,也可以進一步進行穩定細胞株的篩選用于長期的功能學研究。

          RNAi與慢病毒載體技術服務

          近年來的研究表明,將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞,可以使mRNA發生特異性的降解,導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(PTGS)被稱為RNA干擾(RNAi)。通過構建RNAi表達載體制備shRNA(發卡結構小干擾RNA),已成為進行RNA干擾實驗的常用手段之一。 而目前為了感染原代細胞和難感染的細胞系或者在動物水平進行RNAi,研究科學家更多的選擇了慢病毒載體。在RNAi研究中,為了感染原代細胞和難感染的細胞系,科學家開始借助于病毒載體實現RNAi;由于慢病毒可以同時感染分裂和非分裂細胞、整合性以及免疫原性低等優點,目前在RNAi的研究中,基于慢病毒構建的shRNA被最廣泛的使用。    

                                慢病毒感染圖片                                                

          腺病毒包裝

          腺病毒(adenovirus)是一種沒有包膜的直徑為7090 nm的顆粒,由252個殼粒呈廿面體排列構成。每個殼粒的直徑為79 nm。衣殼里是線狀雙鏈DNA分子,約含35 000 bp,兩端各有長約100 bp的反向重復序列。由于每條DNA鏈的5,端同相對分子質量為55X103Da的蛋白質分子共價結合,可以出現雙鏈DNA的環狀結構。人體腺病毒已知有33種,分別命名為adlad33,研究得最詳細是ad2。腺病毒基因組轉錄產生mRNA,已知的轉錄單位至少有5個:正Ⅰ區位于病毒基因組左側,可再分成正ⅠA和正B,與細胞轉化有關;正Ⅱ區編碼DNA結合蛋白,參與病毒的復制;正Ⅲ區編碼出現在宿主細胞表面的一種糖蛋白;正Ⅳ區位于ad2基因組右端,受正Ⅱ區編碼的DNA結合蛋白質調控;第5個轉錄單位在病毒感染中期合成ad2蛋白質Ⅳ。 
          腺病毒特性:
          威斯騰生物腺病毒表達系統是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA為骨架,在克隆、包裝、擴增等各部分條件做了改進和優化,達到了克隆陽性率更高、質量更可靠、包裝穩定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基礎上,提供各種帶有不同報告基因、不同標簽的重組腺病毒載體服務。同時我們還可以根據客戶需要完成各種較高難度的載體構建,如雙基因載體構建,具有細胞毒性作用基因的腺病毒載體構建等。所得到的毒液可以用于信號轉導、基因轉位、Co-IP、動物實驗、干細胞研究等科研實驗。
          我們的服務:
          1)表達目的基因的重組腺病毒載體構建服務(最大插入片段5kb
          2)超大量及超高滴度的重組腺病毒擴增和純化服務
          3)重組腺病毒載體的鑒定
          4shRNA基因沉默效應驗證
          5)表達shRNA的重組腺病毒載體的構建服務
          6)構建各種帶不同標簽和不同報告基因的腺病毒載體
          7)可調控表達的重組腺病毒載體
          8)目的基因的克隆,或者定購
          9)質量控制
          服務承諾:
          1)我們承諾從得到cDNA到完成純化的服務時間將在70個工作日內完成
          2)我們承諾所提供的病毒毒液的滴度在1011PFU/ml以上(純化后),總量不少于1012 PFU/ml
          3 所提供的毒液量:23ml
          4 可以包裝任何有細胞毒性作用的基因;保證100%的包裝成功率

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